价格表
| Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书 |
|---|---|---|---|---|
| HSTTX-111 | 250U | -20℃ |
|
用途
● Realtime RT-PCR
说明
本试剂采用本公司自主研发的 TTx DNA Polymerase，是一款一步法（1-step）qRT-特征
●单酶高效体系，一步完成 RT-PCR
TTx DNA Polymerase 逆转录活性高，即使模板量极少，也能高效完成 RT-PCR。本试剂同样适用于 DNA 检测。
●逆转录可在高温下进行
逆转录反应可在 60℃ 下进行，因此即使面对 GC 含量高（GC-rich）或易形成高级结构的靶标，也能顺利扩增。
●支持高速循环检测
TTx DNA Polymerase 扩增效率高，即使缩短循环时间，也能保证高效扩增。
实验例
1. 流感病毒RNA的检测
分别使用 Hot Start TTx(RNA) Kit 和基于 Tth DNA Polymerase 的实时PCR试剂，以 TaqMan® Probe 检测流感病毒RNA。在 20 μL 反应液中加入 1 μL 稀释的纯化RNA进行反应，结果表明，本试剂的检测灵敏度优于基于 Tth DNA Polymerase 的试剂。
循环条件
90℃ 30sec.
60℃ 5min.
95℃ 1min.
95℃ 15sec. 50 cycles
60℃ 30sec.
2. 高速循环下的 1-step qRT-PCR
使用 Hot Start TTx(RNA) Kit 与市售单酶体系 1-step qRT-PCR 试剂，以 TaqMan® Probe 在高速循环条件下检测流感病毒RNA。 结果显示，只有 Hot Start TTx(RNA) Kit 能实现高效扩增。
产品内容
规格组分
5×Buffer for rTth/ TTx (DNA/RNA)1mL×1支
2mM dNTPs (dATP, dGTP, dCTP, dTTP)1mL×1支
50mM Mn(OAc)₂250μL×1支
Hot Start TTx DNA Polymerase (4U/μL)62.5μL×1支
活性定义：
在 75℃ 活性测定条件下，30 分钟内将 10 nmol 总核苷酸掺入酸不溶性组分所需的酶量定义为 1U。
基本反应条件
用量(μL)组分
灭菌蒸馏水X
5×Buffer for rTth/TTx(DNA/RNA4
2mM dNTPs4
50mM Mn(OAc)₂1
10μM Primer F0.6
10μM Primer R0.
TaqMan® Probe0.3
Hot Start TTx DNA Polymerase0.25
Sample（样品）Y
Total Volume20
使用 Applied Biosystems® 仪器或 Agilent仪器等需要以被动参比（passive reference）校正孔间荧光强度和加样误差时，请选用另售的 50× ROX reference dye［Code No. ROX-101］。
→ 各机型对应的 ROX 添加量请参阅相关说明。
循环条件
90℃ 30sec.
60℃ 5min.
95℃ 1min.
95℃ 15sec. 40～50 cycles
60℃ 30sec.
备注
TaqMan® 是 Roche Diagnostics K.K. 的注册商标。
使用建议
引物终浓度建议各为 0.2–0.6 μM，TaqMan® Probe 终浓度建议为 0.05–0.3 μM，可在此范围内优化。扩增效率不理想时，适当提高用量有时可改善性能；但过量加入反而会引发非特异反应，导致检测灵敏度下降。
Mn(OAc)₂ 的基本添加量为终浓度 2.5 mM，但根据 RNA 样品浓度及扩增靶标序列的不同，适当增减 Mn(OAc)₂ 浓度，可能获得更理想的结果。 在高速循环或粗提样品检测中，若扩增效率不佳，可适当增加酶量（最多2倍），有时能够改善结果。
建议在 55～65℃ 范围内优化 Annealing/Extension（退火/延伸）温度，有助于提高检测灵敏度。
部分实时PCR仪器支持高速循环扩增。某些情况下，变性（Denature）最短1秒、退火/延伸最短1秒即可完成检测，建议结合实际优化变性及退火/延伸时间。
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