● Realtime PCR

本试剂采用本公司自主研发的 TTx DNA Polymerase，是一款Realtime PCR试剂。

与通用酶 Taq DNA Polymerase 相比，TTx DNA Polymerase 扩增效率更高，既支持高速循环 PCR，也能直接扩增含 PCR 抑制物的粗提样品。

该酶具有 5'→3' 外切酶（Exonuclease）活性，适用于 TaqMan® Assay 等探针法实时 PCR。试剂中添加了中和抗体，可实现高特异性的 Hot start PCR。

●出色的DNA扩增效率 

以本公司自主研发的 TTx DNA Polymerase 为核心，对反应体系进行了优化。与 Taq DNA Polymerase、Tth DNA Polymerase 等通用酶相比，该酶延伸能力更强，扩增更高效。 

●支持高速循环检测 

凭借高扩增效率，即使缩短反应循环时间，也能实现高效扩增。

 ●粗样品高耐受性 

对含 PCR 抑制物的粗提样品（生物样本、土壤、食品等）也有出色的扩增能力。血液等样本无需提取核酸，直接加入反应液即可获得充分扩增。

 ●支持多重PCR 

使用检测波长不同的 TaqMan® probe，可在同一反应管内同时检测多个靶标；对照基因与靶基因可同管检出，基因定量快速、简便且准确。

 ●含 dUTPR 

本试剂的 2×Buffer for rTth/ TTx (DNA) 中含 dUTP。配合添加 Uracil-N-Glycosylase（UNG）*，可有效防止残留污染（carry-over contamination）造成的假阳性。 * 本试剂盒不含 UNG，请另行选购 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Heat-labile［UNG-101］。 ● 高速热启动（Hot Start） 采用抗DNA聚合酶抗体的热启动技术。抗体法热启动能强力抑制非特异反应；加热后抗体迅速失活，酶随即恢复活性，从而将高温对酶的损伤降到最低。

 ● 高速热启动（Hot Start） 

采用抗DNA聚合酶抗体的热启动技术。抗体法热启动能强力抑制非特异反应；加热后抗体迅速失活，酶随即恢复活性，从而将高温对酶的损伤降到最低。

1. 百日咳菌IS481基因及人G6PDH基因的检测

使用 TaqMan® Probe，分别以百日咳菌DNA（150,000、3,000、600、120、24、5、1拷贝）为模板扩增 IS481 基因，以 HeLa 细胞 total RNA 来源 cDNA 的5倍稀释（4个梯度）为模板扩增 G6PDH 基因，比较了 Hot Start TTx(DNA) Kit 和以 Taq DNA Polymerase 为基础的Realtime PCR试剂。

结果显示，无论哪个靶标，Hot Start TTx(DNA) Kit 均能获得高效扩增。

上图：百日咳菌IS481基因扩增曲线；左为 Hot Start TTx(DNA) Kit，右为 Taq based reagent（以Taq为基础的试剂）。 

下图：人G6PDH基因扩增曲线；左为 Hot Start TTx(DNA) Kit，右为 Taq based reagent。

2. 高速循环下的Realtime PCR

使用 Hot Start TTx(DNA) Kit 和以 Taq DNA Polymerase 为基础的Realtime PCR试剂，采用 TaqMan® Probe 在高速循环下扩增了非洲猪瘟病毒DNA。 结果显示，仅 Hot Start TTx(DNA) Kit 能在高速循环条件下实现高效扩增。 

循环条件 

温度 时间

 95℃ 2min.

 95℃ 1sec. 50 cycles 

60℃ 1sec.

装置：Roche LightCycler®96

高速循环扩增效率对比 

上图：Hot Start TTx(DNA) Kit（扩增效率：90%，相关系数：-0.999）、A公司Realtime PCR试剂（扩增效率：69%，相关系数：-0.985）、B公司Realtime PCR试剂（扩增效率：57%，相关系数：-0.995）； 图中 増幅効率＝扩增效率，相関係数＝相关系数。

3. 添加血浆时对扩增的影响

使用以 Hot Start TTx(DNA) Kit 和 Taq DNA Polymerase 为基础的Realtime PCR 试剂，通过 TaqMan® 探针对非洲猪瘟病毒（ASFV）DNA 进行了检测。 在 20 μL 反应体系中，分别添加和不添加 2.5 μL 血浆进行对比反应。结果显示：基于 Taq DNA Polymerase 的试剂受到血浆抑制，未能观察到扩增；而使用本试剂（Hot Start TTx 体系）则能够在不受血浆抑制的情况下实现扩增。

4. 基于多重PCR的肠道细菌检测

将沙门氏菌、志贺氏菌（痢疾杆菌）及 O157 的检测用引物和 TaqMan® 探针，分别与以 Hot Start TTx(DNA) Kit 和 Taq DNA Polymerase 为基础的Realtime PCR 试剂混合，通过多重 PCR 对各基因（1,000、250、63、15 拷贝）进行了检测。此外，预先在试剂中添加了模板以及检测用引物、探针作为内部标准。 结果显示：基于 Taq DNA Polymerase 的试剂检测困难，而使用 Hot Start TTx (DNA) Kit 则能够检测到全部 3 种靶标。

サルモネラ → 沙门氏菌 

赤痢菌 → 志贺氏菌 / 痢疾杆菌