高成功率PCR酶　用KOD FX对烟草叶直接进行PCR









【样品】



烟草叶（2mm小块）






【基因名・目的片段大小】




rbcL, rbcmtT　1.3~4.6 kb





【引物】



1.3 kb rbcL
Forward primer:　5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’
Reverse primer:　5’-AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA-3’
2.2 kb rbcmtT
Forward primer: 　5’-TCCCCTTTGCTGACCTGGTAAGATTC-3’
Reverse primer: 　5’-GATAAAAGCCACCTCTCAAGCCCAAG-3’
  4.6 kb rbcmtT
Forward primer:　5’-CGGTAAAGCCAGGAATTGTACCAGAAGG-3’
Reverse primer:　5’-GGAAGATAATGGTGGCCTCAATCAAAGG-3’




【反应液组成】





DW

11 (μl)

2×PCR buffer for KOD FX

25

2mM　dNTPs 

10

10pmol / μl Primer F 

1.5

10pmol / μl Primer R

1.5

KOD FX (1.0U /μl)

1

Total

50 (μl)







【PCR循环条件】



94℃, 2 min
↓
(98℃ 10sec,   68℃  1min./kb) × 35 cycles





【评语】




直接以烟草叶为样品，可对4.6 kb的片段进行扩增。用本方法可简便地对植物进行基因分型。




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