高成功率PCR酶　用KOD FX对指甲直接进行PCR 







【样品】



人指甲（约为米粒的1/3大小）





【基因名・目的片段大小】


Human  β-globin　1.3~8.5 kb





【引物】
1.3 kb β-globin
Forward primer:　5’-TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC-3’
Reverse primer:　5’-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3’
2.8 kb β -globin
Forward primer: 　5’-GCTGCTCTGTGCATCCGAGTGG-3’
Reverse primer: 　5’-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3’
3.6 kb β -globin
Forward primer:　5’-GGTGTTCCCTTGATGTAGCACA-3’
Reverse primer:　5’-ACATGTATTTGCATGGAAAACAACTC-3’
8.5 kb β -globin
Forward primer:　5’-TGATAGGCACTGACTCTCTGTCCCTTGGGCTGTTT-3’
Reverse primer:　5’-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3’ 






【反应液组成】




DW

11 (μl)

2×PCR buffer for KOD FX

25

2mM　dNTPs 

10

10pmol / μl Primer F 

1.5

10pmol / μl Primer R

1.5

KOD FX (1.0U /μl)

1

Total

50 (μl)






【PCR循环条件】



94℃, 2 min
↓
(98℃ 10sec,   68℃  1min./kb) × 35 cycles



【评语】




正如大家所知道的，KOD FX可对全血直接进行PCR，而这次实验直接以指甲为样品，可对8.5 kb大小的片段进行扩增。用本方法可简便地进行基因分型。



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