KOD FX
实验例30: 使用KOD FX的绿脓菌DNA的基因扩增

【样品※】绿脓菌（Pudomonas aeruginosa K767）的染色体DNA

【基因名※】PA5471

【目的片段长】约1.5 kbp

【引物序列※】
Primer F：5’-GCTAGAATTCGATCTACCGTTTCAATCACATGGAT-3’
Primer R：5’-GATCTCTAGAGGCCACCTCCTCGATTACCT-3’

※参考文献
Morita Y, Sobel ML, Poole K.J Bacteriol. 2006 Mar;188(5):1847-55.

【反应液组成】

＜使用KOD FX＞
PCR grade water**       　　　　　0.8 μl
2 × PCR buffer for KOD FX 　　　　5 μl
2 mM dNTPs   　　　　　　　 　　 2 μl
4 μM Primer F  　　     　　　　　 0.75 μl
4 μM Primer R             　　　　 　 0.75 μl
模板DNA*                    　　　　　　0.5 μl
KOD FX(1.0 U/ml)         　　　　　 0.2 μl
-------------------------------------------------------------
Total                           　　　　　　　10μl

＜使用A公司通用酶（Taq Base）＞
PCR grade water**                           6.16 μl
10 × ExTaq buffer                                 1 μl
10 mM dNTPs                                    0.8 μl
4 μM Primer F                                     0.75 μl
4 μM Primer R                                    0.75 μl
模板DNA*                                            0.5 μl
A公司通用酶(5 U/ml)                         0.04 μl
--------------------------------------------------------------
Total                                                       10μl

*约5 μg/μl浓度的绿脓菌染色体DNA按100倍梯度连续稀释。
**使用DMSO时，按终浓度4 %添加DMSO。

※其他公司产品按其说明书配制反应液。

PCR循环】
94 ℃　2 min
↓
（94 ℃ 15 sec,60 ℃ 30 sec,68 ℃ 2 min）35 cycles
↓                 
68 ℃　5 min

【结果】

【数据提供】
爱知学院大学药学部微生物教研室
森田　雄二 老师 

【来自老师的评语】
使用KOD FX，即便不添加DMSO，也可观察到PCR产物。
添加了DMSO的情况下，用KOD FX特异性更高，可观察到非常清晰的条带。