KOD FX
实验例13: 植物样品(叶・米粒)的PCR扩增例

对于难以直接扩增的植物叶子、精米等，可用简便的一步法配制Lysate，以此为样品，用KOD FX进行扩增。

「前处理方法」

【基因名】 rbcL

【样品】  番茄叶、烟草叶、稻叶、精米

【目的片段长】 约  1.3 kb

【引物】
Primer F1:5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ (番茄叶&烟草叶用)
Primer R1:5’-AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA-3’ (番茄叶&烟草叶用)
Primer F2:5’-ATGTCACCACAAACAGAAACTAAAGC-3’ (稻叶用)
Primer R2:5’-AAGCTGCGGCTAGTTCAGGACTCCA-3’ (稻叶用)

【样品】 
   94°C 　2 min.
   (98°C　10 sec. 68°C　1.5 min.)×30cycles
※引物的Tm值未满72℃的情况下，请用三步法。

【PCR组成】

　灭菌蒸馏水                        　　　　 　　　　10<μl>
   2x PCR Buffer for KOD FX　  　　    　　 　 25
   2mM dNTPs　　　　　　　　　　　　　　10 (0.4 mM)
   10 pmol/μl F　　  　              　　　　　　　1.5
   10 pmol/μl R　　                  　　　　     　　1.5
   KOD FX (1U/μl)  　　　　　　　     　　　　1(1U)
   Lysate(一步法)　 　　　　     　　　              1     
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　Total             　　　　　　　　　　　　　　50 μl　

【结果】

【评语】
用本方法，以番茄叶、烟草叶、稻叶及精米的Lysate为样品，均可确认到明亮的扩增条带。(该扩增只有在用KOD FX的情况下才能确认到)。用一步法结合KOD FX，即可大大简化植物基因分析的步骤。