KOD Long PCR Master Mix

本产品是含有改良型KOD DNA聚合酶（UKOD）的PCR用2×预混液（Master Mix）。

通过在具有高保真性和扩增效率的改良型KOD DNA聚合酶（UKOD）中添加延伸加速剂（extension accelerator），在保持高保真性的同时，实现了对10 kb以上靶标也能以10秒/kb的延伸时间进行高速PCR。本试剂最适合用于长读长测序（long-read sequencing）的长片段靶标扩增，具有极高的成功率。同时也可适用于从粗样品（crude samples）中进行扩增。

本产品混合了两种单克隆抗体，可分别抑制聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，因此能够进行高特异性热启动PCR（Hot start PCR）。

● 最适合长读长测序的长片段靶标扩增

以人基因组DNA为模板，可实现约50 kb的扩增。即使是长片段靶标也能快速且准确地扩增，因此最适合用于长读长测序的模板扩增。

● 高速PCR

对于1~10 kb的靶标，可以实现每1 kb延伸5秒的扩增。对于10 kb以上的靶标也能以每kb延伸10秒的条件进行高速PCR，大幅缩短PCR反应时间。由于也可以设置较长的延伸时间，因此可以在同一循环程序中扩增各种不同长度的靶标。

● 高保真性

具有约Taq DNA聚合酶80倍的保真性（与KOD-Plus系列同等）。扩增产物可用于克隆等多种用途。

● 可扩增GC富集、AT富集的靶标

不依赖靶标序列即可进行扩增。本产品由于能够实现低偏差且高速的扩增，因此也最适合用于长读长文库的扩增。

● 可从粗样品中直接扩增

通过添加延伸加速剂，提高了扩增的可靠性。无需从含有PCR抑制物质的粗样品（生物样品、土壤、食品等）中纯化核酸，即可直接扩增目的基因。

1. 通过高速PCR扩增长片段靶标（~47.5 kb）

使用KOD Long PCR Master Mix，以人基因组DNA为模板，对1~47.5 kb的靶标进行了扩增。

结果显示，使用本产品可成功检出所有长达47.5 kb的长片段靶标的扩增产物。

 2. PCR产物的长读长测序分

对实施例1中扩增的47.5 kb PCR产物进行纯化后，使用Ligation sequencing DNA V14（货号：SQK-LSK114；Oxford Nanopore Technologies），按照推荐方案制备了长读长测序用文库。

所得文库使用Flongle™ Flow Cell（R10.4.1）（货号：FLO-FLG114；Oxford Nanopore Technologies）进行长读长测序。

结果显示，获得了覆盖47.5 kb全长的读段（reads），确认了目标序列已被正确扩增。